考慮實驗?zāi)康暮蛻?yīng)用場景不同的實驗?zāi)康暮蛻?yīng)用場景可能需要不同類型的轉(zhuǎn)染試劑。***應(yīng)用：如果轉(zhuǎn)染試劑用于基因***或藥物研發(fā)等應(yīng)用，那么需要選擇具有良好生物相容性和**性的試劑。在**有效的遞送mRNA使用改性PEI基脂質(zhì)聚合物的研究中，探索了All-Fect和Leu-FectC作為新型轉(zhuǎn)染試劑，這些試劑具有優(yōu)異的生物相容性、高效的遞送能力和強大的溶酶體逃逸能力，可直接增加mRNA穩(wěn)定性并促進(jìn)高效基因翻譯，適用于基因***等應(yīng)用4?；A(chǔ)研究：對于基礎(chǔ)研究實驗，可能更注重轉(zhuǎn)染效率和實驗的可重復(fù)性。在不同轉(zhuǎn)染方式用于modRNA轉(zhuǎn)染人脂肪干細(xì)胞的初步研究中，比較了不同轉(zhuǎn)染方式的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)情況，以及在體內(nèi)促進(jìn)血管再生的效果，為基礎(chǔ)研究提供了參考10。綜上所述，選擇**適合的RNA轉(zhuǎn)染試劑需要綜合考慮轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞毒性、RNA需求、血清兼容性、多因子轉(zhuǎn)染能力以及實驗?zāi)康暮蛻?yīng)用場景等多個因素。在選擇轉(zhuǎn)染試劑時，可以參考已有的研究文獻(xiàn)，進(jìn)行預(yù)實驗以評估不同試劑的性能，并根據(jù)實驗需求和條件選擇**合適的轉(zhuǎn)染試劑。在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。山東轉(zhuǎn)染試劑

網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑呼吸道合胞病毒（RSV）是導(dǎo)致嬰幼兒***的主要病毒病原體。研究表明，網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)型內(nèi)吞途徑是目前研究得較為透徹且經(jīng)典的病毒入胞途徑。其中網(wǎng)格蛋白在此途徑中的地位很重要。通過針對網(wǎng)格蛋白重鏈的小干擾RNA（siRNA）抑制網(wǎng)格蛋白的表達(dá)，可以有效的抑制RSV***Hela細(xì)胞。這提示網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑在病毒感染細(xì)胞過程中發(fā)揮重要作用，同時也暗示了在某些情況下，RNA轉(zhuǎn)染試劑可能利用這一途徑進(jìn)入細(xì)胞21。二、小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑在研究非病毒載體用于小干擾RNA（siRNA）遞送時發(fā)現(xiàn)，將用組氨酸和半胱氨酸修飾的HIV-1Tat肽（mTat）與聚乙烯亞胺（PEI）結(jié)合，并與陽離子兩親脂質(zhì)基試劑INTERFERin（INT）組合成的雜合載體（mTat/PEI/INT）能高效遞送siRNA。研究表明，F(xiàn)ilipinIII和β-環(huán)糊精（小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用抑制劑）能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉(zhuǎn)染，而氯丙嗪（網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用抑制劑）則不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉(zhuǎn)染。此外，mTat/PEI/INT在4°C時的轉(zhuǎn)染效率明顯低于37°C。這些結(jié)果表明，mTat/PEI/INT作為一種潛在的有吸引力的非病毒載體用于siRNA遞送，其轉(zhuǎn)染過程可能是通過小窩蛋白介導(dǎo)且依賴溫度的內(nèi)吞途徑實現(xiàn)的。中國臺灣脾轉(zhuǎn)染試劑納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運到細(xì)胞中的保護(hù)能力，在不久的將來可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。

在人類多能干細(xì)胞衍生的心肌細(xì)胞（HPSC-CMs）中的應(yīng)用低轉(zhuǎn)染效率是實現(xiàn)HPSC-CMs在疾病建模和心臟修復(fù)研究中廣泛應(yīng)用的障礙。通過優(yōu)化四個基本參數(shù)，即血清補充劑、復(fù)制和轉(zhuǎn)染之間的時間、試劑與DNA比以及細(xì)胞密度，使用Promega的Viafect?轉(zhuǎn)染試劑能夠?qū)PSC-CMs轉(zhuǎn)染至約95%的效率28。盡管活力有所降低，但轉(zhuǎn)染后的HPSC-CMs仍保持了高純度和結(jié)構(gòu)完整性，確保了至少14天的轉(zhuǎn)染基因持續(xù)表達(dá)，為心臟相關(guān)疾病的研究開辟了新機遇。在C2C12細(xì)胞中的應(yīng)用C2C12細(xì)胞在肌肉領(lǐng)域***使用，但它們和原代成肌細(xì)胞一樣難以轉(zhuǎn)染，影響了下游實驗。雖然自2015年以來超過95%的使用C2C12細(xì)胞的報告使用了一種金標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染劑（如Lipofectamine®），但有研究表明其效率低于30%。通過比較五種商業(yè)試劑（Lipofectamine®3000、Viafect?、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®）在C2C12細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率，發(fā)現(xiàn)通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細(xì)胞密度，所有試劑都能達(dá)到超過60%的轉(zhuǎn)染效率，且對細(xì)胞生長和活力影響有限。這些試劑還能在C2C12細(xì)胞中轉(zhuǎn)染后高效生成GFP陽性的肌管，但在轉(zhuǎn)染siRNA和對原代肌肉細(xì)胞的轉(zhuǎn)染中表現(xiàn)出較低效率和較高毒性3。

    在鯉上皮瘤細(xì)胞中的應(yīng)用在鯉上皮瘤細(xì)胞進(jìn)行基因功能研究時，轉(zhuǎn)染試劑和DNA的劑量以及取樣時間缺乏統(tǒng)一的數(shù)據(jù)支持。選取兩種常用轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine®2000和FuGENE®HD進(jìn)行多配組轉(zhuǎn)染試驗，在28℃，以35mm培養(yǎng)皿鋪板，16μLLipofectamine®2000和4μgDNA在轉(zhuǎn)染后48h達(dá)到比較高轉(zhuǎn)染效率(±)%；12μLFuGENE®HD和4μgDNA在轉(zhuǎn)染72h后轉(zhuǎn)染效率達(dá)到(±)%。通過構(gòu)建鯉高不飽和脂肪酸合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子過氧化物酶體增殖物***受體蛋白α（PPARα）的EGFP標(biāo)簽載體進(jìn)行驗證，兩種轉(zhuǎn)染試劑分別獲得了約4%和約8%的轉(zhuǎn)染效率，并對下游脂肪酸去飽和酶2（fads2）基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控效應(yīng)進(jìn)行檢測，結(jié)果為后續(xù)利用鯉上皮瘤細(xì)胞進(jìn)行基因功能研究提供了數(shù)據(jù)支持5。在巨噬細(xì)胞中的應(yīng)用商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine已***用于核酸的細(xì)胞質(zhì)遞送和與細(xì)胞內(nèi)先天免疫傳感器進(jìn)行細(xì)胞源嚙合，以觸發(fā)I型干擾素（IFN）生產(chǎn)。然而，單獨對IIFN響應(yīng)的脂質(zhì)切積胺的影響尚未詳細(xì)研究。研究表明，Lipofectamine誘導(dǎo)在原始，I型IFN誘導(dǎo)依賴于干擾素調(diào)節(jié)因子（IRF）3和IRF7，并且部分需要達(dá)洛/白細(xì)胞介素-1受體-含有結(jié)構(gòu)域的適配器誘導(dǎo)的干擾素-β。相比之下，轉(zhuǎn)染試劑XFECT未***IIFN信令6。 脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。

優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法篩選**適電壓和脈沖時間：不同細(xì)胞種類電轉(zhuǎn)所需的**適電壓和脈沖時間不同。例如，人成纖維細(xì)胞電轉(zhuǎn)modRNA的**適電壓為440V，**適脈沖時間為30ms；Hela、293T、3T3細(xì)胞電轉(zhuǎn)**適電壓分別為425V、400V、440V，**適脈沖時間均為30ms；人/兔外周血來源的懸浮的單個核細(xì)胞的**適電壓分別為840V和860V，**適脈沖時間均為20ms。通過篩選**適電壓和脈沖時間，可以提高RNA轉(zhuǎn)染效率，同時證明了電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)染modRNA進(jìn)入細(xì)胞的可行性，且可同時將兩種modRNA導(dǎo)入同一個細(xì)胞內(nèi)6。RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。轉(zhuǎn)染時推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基包括陽離子轉(zhuǎn)染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。上海轉(zhuǎn)染試劑代做

deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。山東轉(zhuǎn)染試劑

準(zhǔn)確控制脂質(zhì)體與核酸的比例是關(guān)鍵。通過實驗確定比較好的脂質(zhì)體 - 核酸復(fù)合物比例，一般可以進(jìn)行梯度實驗，從較低比例開始逐步增加，觀察轉(zhuǎn)染效率的變化。例如，不同類型的細(xì)胞對脂質(zhì)體和 RNA 或 DNA 的比例要求不同，像在轉(zhuǎn)染 HEK293 細(xì)胞時，可能 1:3（脂質(zhì)體：核酸）的比例比較合適，而對于較難轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞，可能需要適當(dāng)增加脂質(zhì)體的用量。

不同配方的脂質(zhì)體在轉(zhuǎn)染效率上有差異。根據(jù)細(xì)胞類型和實驗?zāi)康倪x擇合適的脂質(zhì)體試劑。例如，一些脂質(zhì)體含有特殊的功能成分，如靶向基團(tuán)可以增強與特定細(xì)胞的結(jié)合，或者具有促進(jìn)內(nèi)吞體逃逸的成分，從而提高轉(zhuǎn)染效率。新型的脂質(zhì)體制劑不斷涌現(xiàn)，如含有可電離陽離子脂質(zhì)的脂質(zhì)體，在生理 pH 條件下呈電中性，減少與血清蛋白的相互作用，進(jìn)入酸性的內(nèi)體后帶正電，更有利于與內(nèi)體膜融合，釋放核酸，在提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低細(xì)胞毒性。 山東轉(zhuǎn)染試劑