2025-02-09 01:05:55
使用BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads(血液基因組DNA提取試劑盒,磁珠法)進(jìn)行血液樣本中基因組DNA的提取,主要步驟如下:1.**實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備**:準(zhǔn)備抗凝全血樣本(如EDTA抗凝血),移液器及無(wú)菌,15ml離心管,無(wú)水乙醇,70%乙醇,干凈的吸水紙,渦旋振蕩器,金屬浴/水浴,臺(tái)式離心機(jī)等。2.**樣本處理**:取適量血液樣本,根據(jù)試劑盒要求,可能需要將血液體積調(diào)整至特定量,例如200μl,并可能需要加入PBS緩沖液。3.**裂解血液細(xì)胞**:向血液樣本中加入蛋白酶K和細(xì)胞裂解液,渦旋混勻后,置于金屬浴或水浴中進(jìn)行裂解,通常在65°C孵育10-15分鐘,并在此期間定期混勻。4.**DNA與磁珠結(jié)合**:向裂解后的樣本中加入異丙醇和磁珠懸浮液,渦旋混勻后,室溫放置一段時(shí)間,以便于基因組DNA與磁珠結(jié)合。5.**磁珠分離**:將樣本置于磁力架上,待磁珠聚集后,小心移除上清液,去除雜質(zhì)。6.**洗滌磁珠**:向磁珠中加入漂洗液和洗滌液,進(jìn)行洗滌以去除殘留的蛋白質(zhì)和鹽分,然后再次使用磁力架分離磁珠,移除洗滌液。
CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù),它們有一些關(guān)鍵的區(qū)別:1.**技術(shù)原理**:-**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:ChIC技術(shù)利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結(jié)合來(lái)進(jìn)行DNA切割。ChIC的優(yōu)勢(shì)在于使用TF特異性抗體系住MNase,并只在結(jié)合位點(diǎn)裂解。-**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:CUT&RUN技術(shù)則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復(fù)合物,留下寡核小體。CUT&RUN通過(guò)在冰上進(jìn)行簡(jiǎn)短的消化反應(yīng),在TF結(jié)合的MNase擴(kuò)散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質(zhì)之前在上清中恢復(fù)TF-DNA復(fù)合物。2.**操作步驟和簡(jiǎn)便性**:-**ChIC**:ChIC可能需要甲醛固定操作,這可能重新引入了ChIP-seq的一些問(wèn)題,如交聯(lián)導(dǎo)致的DNA和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾。-**CUT&RUN**:CUT&RUN簡(jiǎn)化了操作步驟,使用磁珠固定細(xì)胞核,適用于新鮮和冷凍組織樣本,縮短了生成DNA測(cè)序文庫(kù)的時(shí)間(1-2天)。3.**背景信號(hào)和信噪比**:-**ChIC**:ChIC產(chǎn)生的背景信號(hào)可能較高,因?yàn)樗赡苌婕暗椒翘禺愋缘腄NA切割。
磁珠法DNA凝膠回收試劑盒是一種用于從DNA瓊脂糖凝膠中回收特定DNA片段的實(shí)驗(yàn)室工具。與傳統(tǒng)的柱純化方法相比,磁珠法具有多個(gè)優(yōu)勢(shì):1.**操作簡(jiǎn)便快捷**:磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的操作步驟通常包括凝膠的融化、DNA的結(jié)合、磁珠的洗滌和DNA的洗脫,整個(gè)過(guò)程可以在20分鐘內(nèi)完成。2.**高純度和高回收率**:磁珠法能夠穩(wěn)定、高效地從凝膠中回收DNA,純化所得的DNA可直接用于酶切、連接、轉(zhuǎn)化細(xì)菌、測(cè)序、PCR、雜交等后續(xù)操作。通?;厥章蔬_(dá)到60-80%,對(duì)于200bp以下小片段和10kb以上大片段的回收率有所下降。3.**適用性廣**:適用于100bp以上DNA片段的純化,對(duì)達(dá)到10kb片段DNA的純化也能保持較好的效果。4.****性高**:操作過(guò)程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和**。5.**靈活性**:可以根據(jù)實(shí)際狀況靈活調(diào)節(jié)磁珠用量,適應(yīng)不同體積和濃度的樣品處理。6.**自動(dòng)化和高通量**:磁珠法純化試劑盒適合手工操作,也可用于自動(dòng)化工作站或核酸自動(dòng)提取儀,實(shí)現(xiàn)高通量操作。
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,簡(jiǎn)稱λExonuclease)是一種具有特定特性和應(yīng)用的酶,以下是其主要特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**特異性作用**:λExonuclease是一種5'→3'核酸外切酶,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**酶切活性**:對(duì)單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**嗜磷酸性**:該酶具有非常強(qiáng)的嗜磷酸性,磷酸化的核酸鏈與非磷酸化的核酸鏈的切割效率相差達(dá)200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一種具有高度持續(xù)性的堿性核酸外切酶,可以連續(xù)地將核酸切割成為單個(gè)堿基,切割比較高速率可以達(dá)到1000nt/S。5.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-生成單鏈PCR產(chǎn)物用于DNA測(cè)序。-DNA單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析。-滾環(huán)擴(kuò)增。-從雙鏈DNA片段生成單鏈DNA。-PCR產(chǎn)物的克隆。-質(zhì)粒制備凈化。6.**酶活性定義**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37?Cin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。泛素從E1轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶E2的活性位點(diǎn)半胱氨酸殘基上,形成E2-泛素硫酯中間體。
BstDNAPolymerase,LargeFragment(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段)是一種經(jīng)過(guò)改造的酶,它來(lái)源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)DNA聚合酶I,通過(guò)重組技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)并純化獲得。這種酶具有5'→3'的DNA聚合酶活性,但不具有5'→3'的核酸外切酶活性,因此它在等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)中非常有用,如環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)等。以下是BstDNAPolymerase,LargeFragment的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**等溫?cái)U(kuò)增**:BstDNAPolymerase,LargeFragment具有很強(qiáng)的鏈置換能力,適用于多種等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),這些反應(yīng)通常在50-68°C之間進(jìn)行,比較好反應(yīng)溫度為65°C。2.**快速測(cè)序**:由于其高聚合酶活性,BstDNAPolymerase,LargeFragment可以用于快速測(cè)序,特別是對(duì)于高GC含量的DNA模板或微量(納克量級(jí))DNA模板的測(cè)序。3.**全基因組擴(kuò)增**:BstDNAPolymerase,LargeFragment也可用于全基因組擴(kuò)增(WGA),這是一種在不需要熱循環(huán)儀的情況下擴(kuò)增整個(gè)基因組DNA的技術(shù)。4.**高dUTP耐受性**:與BstDNAPolymerase2.0相比,BstDNAPolymerase,LargeFragment在進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增時(shí)不具有將dUTP摻入合成的DNA鏈的能力,這使得它在某些應(yīng)用中更具優(yōu)勢(shì)。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit 是一種用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的試劑盒,它結(jié)合了反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增步驟。Recombinant Mouse CD228/MFI2 Protein,His Tag
使用 Tn5 轉(zhuǎn)座酶可以保證 DNA的 片段化的質(zhì)量,同時(shí)獲得的蛋白純度高、核酸殘留低,能夠?yàn)楹罄m(xù)的實(shí)驗(yàn)。Recombinant Human PAH (D415N) Protein,His Tag
BsuDNAPolymerase(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶)在PCR中的應(yīng)用具有多個(gè)優(yōu)勢(shì),以下是一些關(guān)鍵點(diǎn):1.**鏈置換活性**:BsuDNAPolymerase具有很強(qiáng)的鏈置換活性,這使得它非常適合于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)。在這些技術(shù)中,BsuDNAPolymerase可以快速、高效、特異性地?cái)U(kuò)增模板,在10到30分鐘內(nèi)將痕量的核酸模板(低至單拷貝)擴(kuò)增至可以檢出的水平。2.**高溫穩(wěn)定性**:BsuDNAPolymerase在高溫下保持活性,這使得它在一些需要高溫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件下表現(xiàn)出色。3.**高靈敏度和特異性**:BsuDNAPolymerase在等溫?cái)U(kuò)增中展現(xiàn)出高靈敏度,能夠?qū)⑽⒘亢怂崮0鍞U(kuò)增到可檢測(cè)水平。同時(shí),它也具有高特異性,減少了非特異性擴(kuò)增的風(fēng)險(xiǎn)。4.**簡(jiǎn)化的樣品處理**:BsuDNAPolymerase可以直接對(duì)復(fù)雜樣品進(jìn)行擴(kuò)增,無(wú)需事先進(jìn)行復(fù)雜的核酸純化和提取步驟,節(jié)省了時(shí)間和成本。5.**可擴(kuò)增DNA和RNA**:BsuDNAPolymerase不僅可以擴(kuò)增DNA,還可以直接擴(kuò)增RNA,省去了額外的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(cDNA合成)步驟,這對(duì)于RNA的檢測(cè)和分析更加方便快捷。6.**無(wú)核酸外切酶和RNase殘留**:BsuDNAPolymerase在生產(chǎn)過(guò)程中確保無(wú)核酸外切酶、切口酶及RNase殘留,這有助于提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。Recombinant Human PAH (D415N) Protein,His Tag