魚精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用，其具體作用機(jī)制主要包括以下幾個方面：一、保護(hù)RNA免受降解魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負(fù)電荷的RNA通過相反電荷驅(qū)動耦合23。在生物系統(tǒng)中，RNA很容易被RNase降解，而魚精蛋白可以與RNA復(fù)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而保護(hù)RNA免受降解1213。例如，通過將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚精蛋白復(fù)合，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213。二、增強(qiáng)細(xì)胞穿透性魚精蛋白不僅可以保護(hù)RNA，還能增強(qiáng)RNA的穿透細(xì)胞的能力。魚精蛋白-RNA復(fù)合物的形成具有雙重功能，一方面保護(hù)RNA不被降解，另一方面增強(qiáng)其穿透進(jìn)入細(xì)胞的能力23。這種增強(qiáng)的細(xì)胞穿透性可能是由于魚精蛋白的陽離子性質(zhì)，使其能夠與細(xì)胞膜相互作用，促進(jìn)RNA的進(jìn)入細(xì)胞2。在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。天津大鼠轉(zhuǎn)染試劑

    RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的效果存在***差異。以下將詳細(xì)闡述不同細(xì)胞類型對RNA轉(zhuǎn)染試劑效果的具體影響。腎*細(xì)胞系786-O和ACHN：微小RNA-1180（miR-1180）轉(zhuǎn)染對腎*細(xì)胞系786-O和ACHN生長有影響。實(shí)時定量（qRT）-PCR檢測顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后，786-O和ACHN細(xì)胞中p21mRNA水平分別上調(diào)。Westernblot檢測表明p21蛋白表達(dá)趨勢與qRT-PCR結(jié)果相符，同時細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）4、CDK6和CyclinD1蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)。流式細(xì)胞術(shù)（FCM）結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后，位于G0/G1期的細(xì)胞比例明顯增大，而位于S期和G2/M期的細(xì)胞比例明顯下降，表明細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期。MTS結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后，兩種腎*細(xì)胞活力明顯降低。集落形成實(shí)驗(yàn)顯示miR-1180組的集落數(shù)數(shù)量明顯較少，表明細(xì)胞增殖能力降低1。HeLa細(xì)胞：兩種常見的RNA干擾（RNAi）轉(zhuǎn)染試劑DharmaFECT1和INTERFERin，在使用非靶向siRNAs的模擬轉(zhuǎn)染中，會引起HeLa細(xì)胞脂質(zhì)組的改變。一些脂質(zhì)對兩種可能化學(xué)性質(zhì)不同的轉(zhuǎn)染試劑都有反應(yīng)，而其他脂質(zhì)種類只對其中一種試劑有反應(yīng)。雖然這些脂質(zhì)組改變的功能影響尚待研究，但實(shí)驗(yàn)表明在RNAi實(shí)驗(yàn)中使用適當(dāng)?shù)哪M轉(zhuǎn)染對照非常重要，比較好輔以正交擾動。 浙江轉(zhuǎn)染試劑公司轉(zhuǎn)染時推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基包括陽離子轉(zhuǎn)染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。

RNA轉(zhuǎn)染試劑是一類能夠?qū)NA分子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)，其作用原理主要涉及以下幾個方面。利用電荷相互作用：許多RNA轉(zhuǎn)染試劑是陽離子性的，它們可以與帶負(fù)電荷的RNA分子通過靜電相互作用結(jié)合形成復(fù)合物。例如，魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于相反電荷驅(qū)動的耦合作用，被用于細(xì)胞內(nèi)核酸的遞送8。魚精蛋白不僅可以保護(hù)RNA免受生物系統(tǒng)中的降解，還能增強(qiáng)其對細(xì)胞的穿透能力。陽離子脂質(zhì)體也是常見的轉(zhuǎn)染試劑之一。以LipofectamineTM2000為例，它可以介導(dǎo)攜帶綠色熒光蛋白基因的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至雞成骨細(xì)胞9。陽離子脂質(zhì)體通過其陽離子頭部與RNA的負(fù)電荷相互作用，形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物，然后通過與細(xì)胞膜的融合或內(nèi)吞作用將RNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。內(nèi)吞作用途徑：一些RNA轉(zhuǎn)染試劑通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。如合成的8-mer兩親性反式多聚2'-O-甲基尿苷硫代磷酸三酯RNA元件（2'-OMeUtaPS），它能介導(dǎo)將不帶電荷的聚A尾磷酸二酰胺基嗎啉代序列（PMO）高效遞送至HeLapLuc705細(xì)胞或肌管肌肉細(xì)胞。已確定大胞飲作用是HeLapLuc705細(xì)胞中使用的主要內(nèi)吞途徑。

納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細(xì)胞攝取的機(jī)制。以蒲公英湯劑體為例，研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進(jìn)入細(xì)胞；巨胞飲抑制劑細(xì)胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入，且呈現(xiàn)劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進(jìn)入細(xì)胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過內(nèi)吞進(jìn)入A549細(xì)胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理，RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進(jìn)入細(xì)胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù)，在研究其機(jī)制時發(fā)現(xiàn)，用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細(xì)胞系（HEK293、HCT116和HT29）。結(jié)果表明，用冰冷介質(zhì)、氯丙嗪或染料木黃酮處理會***降低所有三種細(xì)胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率，但阿米洛利處理對電穿孔轉(zhuǎn)染效率影響不***。對于用小干擾RNA（siRNA）處理的細(xì)胞，只有敲低網(wǎng)格蛋白重鏈（CLTC）會導(dǎo)致所有三種細(xì)胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率降低。這些數(shù)據(jù)表明，網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用在電穿孔轉(zhuǎn)染中起著重要作用27。RNA 轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的轉(zhuǎn)染機(jī)制存在多種差異。

在人類多能干細(xì)胞衍生的心肌細(xì)胞（HPSC-CMs）中的應(yīng)用低轉(zhuǎn)染效率是實(shí)現(xiàn)HPSC-CMs在疾病建模和心臟修復(fù)研究中廣泛應(yīng)用的障礙。通過優(yōu)化四個基本參數(shù)，即血清補(bǔ)充劑、復(fù)制和轉(zhuǎn)染之間的時間、試劑與DNA比以及細(xì)胞密度，使用Promega的Viafect?轉(zhuǎn)染試劑能夠?qū)PSC-CMs轉(zhuǎn)染至約95%的效率28。盡管活力有所降低，但轉(zhuǎn)染后的HPSC-CMs仍保持了高純度和結(jié)構(gòu)完整性，確保了至少14天的轉(zhuǎn)染基因持續(xù)表達(dá)，為心臟相關(guān)疾病的研究開辟了新機(jī)遇。在C2C12細(xì)胞中的應(yīng)用C2C12細(xì)胞在肌肉領(lǐng)域***使用，但它們和原代成肌細(xì)胞一樣難以轉(zhuǎn)染，影響了下游實(shí)驗(yàn)。雖然自2015年以來超過95%的使用C2C12細(xì)胞的報(bào)告使用了一種金標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染劑（如Lipofectamine®），但有研究表明其效率低于30%。通過比較五種商業(yè)試劑（Lipofectamine®3000、Viafect?、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®）在C2C12細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率，發(fā)現(xiàn)通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細(xì)胞密度，所有試劑都能達(dá)到超過60%的轉(zhuǎn)染效率，且對細(xì)胞生長和活力影響有限。這些試劑還能在C2C12細(xì)胞中轉(zhuǎn)染后高效生成GFP陽性的肌管，但在轉(zhuǎn)染siRNA和對原代肌肉細(xì)胞的轉(zhuǎn)染中表現(xiàn)出較低效率和較高毒性3?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。中國香港mRNA轉(zhuǎn)染試劑

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。天津大鼠轉(zhuǎn)染試劑

考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用場景不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用場景可能需要不同類型的轉(zhuǎn)染試劑。***應(yīng)用：如果轉(zhuǎn)染試劑用于基因***或藥物研發(fā)等應(yīng)用，那么需要選擇具有良好生物相容性和**性的試劑。在**有效的遞送mRNA使用改性PEI基脂質(zhì)聚合物的研究中，探索了All-Fect和Leu-FectC作為新型轉(zhuǎn)染試劑，這些試劑具有優(yōu)異的生物相容性、高效的遞送能力和強(qiáng)大的溶酶體逃逸能力，可直接增加mRNA穩(wěn)定性并促進(jìn)高效基因翻譯，適用于基因***等應(yīng)用4?；A(chǔ)研究：對于基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，可能更注重轉(zhuǎn)染效率和實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。在不同轉(zhuǎn)染方式用于modRNA轉(zhuǎn)染人脂肪干細(xì)胞的初步研究中，比較了不同轉(zhuǎn)染方式的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)情況，以及在體內(nèi)促進(jìn)血管再生的效果，為基礎(chǔ)研究提供了參考10。綜上所述，選擇**適合的RNA轉(zhuǎn)染試劑需要綜合考慮轉(zhuǎn)染效率、細(xì)胞毒性、RNA需求、血清兼容性、多因子轉(zhuǎn)染能力以及實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用場景等多個因素。在選擇轉(zhuǎn)染試劑時，可以參考已有的研究文獻(xiàn)，進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以評估不同試劑的性能，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和條件選擇**合適的轉(zhuǎn)染試劑。天津大鼠轉(zhuǎn)染試劑